来源:《长春理工大学学报(自然科学版)》2018年第05期  作者:孙婷婷;孙基丰;周紫薇;褚春旭;张昊;
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醛酮还原酶AKR7A3原核表达条件的优化及酶学活性检测

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AKR7A3属醛酮还原酶是NADPH依赖型的氧化还原酶超家族的一员,参与人体内很多极为重要的生理活动。本文构建原核表达载体,优化表达条件,获得可溶性好、活性高的AKR7A3属醛酮还原酶。研究了温度、转速、诱导时间和IPTG浓度等不同条件对AKR7A3酶表达量的影响,并进行了酶活性动力学检测分析。在16℃、110rpm/min、20h、1.00mM/L诱导剂浓度时AKR7A3可溶性蛋白达到99.0%。酶活性动力学检测结果说明在37℃;PH=7.0;NADPH浓度2mmol/L;底物浓度在2.00mmol/L;加酶量100μL时酶活性最好,最佳反应底物为睾丸酮。成功在大肠杆菌中表达出高活性的可溶性酶蛋白,并获得了体外酶活性的最佳动力学条件,为后续AKR7A3基础研究和应用研究提供实验基础。(本文共计5页)......[继续阅读本文]

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