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来源:《重庆医学》2019年第09期  作者:全钢;贾铠宁;于果;许尧祥;岳金;肖文林;
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兔p38MAPK基因沉默腺病毒载体构建及体外干扰效率的鉴定

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目的构建并筛选p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)基因沉默腺病毒载体,为进一步研究及应用p38MAPK基因沉默进行瘢痕增生基因治疗奠定基础。方法依据兔p38MAPK基因的cDNA序列,设计并合成3对干扰序列,并对腺病毒进行包装。分别将以上3对双链DNA oligo退火后连入pDC316-ZsGreenshRNA载体,经PCR及测序鉴定后,将以上质粒分别与包装质粒混合物共转染HEK293A细胞,包装产生病毒颗粒。各组病毒载体转染兔皮肤成纤维细胞后,运用实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测p38MAPK表达水平。结果 PCR和测序证实目的双链DNA oligo片段已被准确克隆到pDC316-ZsGreen-ShRNA载体;realtime PCR检测到各组慢病毒感染兔皮肤成纤维细胞后均可以明显抑制p38MAPK mRNA的表达(P<0.05)。以AD-shRNA-P38MAPK-1组抑制效果最明显。结论成功构建并筛选出针对p38MAPK的最有效RNAi腺病毒表达载体;构建的腺病毒载体可以抑制兔皮肤成纤维细胞p38MAPK的表达。(本文共计5页)......[继续阅读本文]

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