来源:《大连大学学报》2016年第06期  作者:丁宁;邱景剑;王定友;李劭恒;张云;李坤;
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人核糖核酸酶抑制因子siRNA慢病毒载体的构建及鉴定

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人核糖核酸酶抑制因子(human ribonucleaseinhibitor,h RI)是一种广泛存在于细胞的可溶性酸性糖蛋白,分子量为50k D,能紧密结合血管形成因子(Angionenin,Ang)[1,2]。已有实验证实,RI可能有效地抑制肿瘤诱导血管生成[3,4]。因此人们推测h RI可能为抗肿瘤血管活性的抑制基因,有望应用于肿瘤的基因治疗中。以往的工作将靶向RI基因构建于逆转录病毒载体上,但是该载体在分裂不活跃的细胞中如神经元细胞中的转染效率较低,因而本研究构建了RNA干扰人RI基因的慢病毒载体,旨在利用RNAi技术沉默分裂不活跃的细胞中的RI基因,为下一步深入研究打下基础。1材料与方法1.1材料慢转录病毒表达载体p LKO.1-TRC(图1)、E.coliDH5α由大连大学医学院生物化学与分子生物学教研室保存;针对人核糖核酸酶抑制因子si RNA表达载体Simple T-ds RI由大连Takara生物公司构建[3]。限制性内切酶Eco R1、DNA Marker、T4DNA连接酶购自Ta Ka Ra;限制性内切酶Age1购自NEB;DNA快速凝胶产物回收试剂盒购自博大泰克(本文共计4页)......[继续阅读本文]

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