来源:《中国国境卫生检疫杂志》2019年第05期  作者:陈国强;李永旺;王凯民;唐泰山;姜焱;朱婷;陆春华;时长军;
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寨卡病毒SYBR Green qPCR检测方法的建立

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目的建立寨卡病毒的实时定量PCR(qPCR)检测方法。方法比较公布的寨卡病毒核酸序列,在保守区域NS5设计引物,用重组质粒建立标准曲线分析建立的qPCR方法的扩增效率和线性范围,用6个寨卡病毒分离株及登革病毒、基孔肯雅病毒、黄热病毒、乙脑病毒等其他黄病毒核酸进行灵敏性和特异性分析,并与3对已公布的寨卡病毒引物进行比较。结果针对寨卡病毒NS5基因设计了1对引物并建立了SYBR Green q PCR方法,以重组质粒为模板的扩增效率为89.3%,在2.0×10~1~2.0×10~8拷贝/μl范围内线性关系良好,最低可检测到100拷贝/反应。以ZIKV GD01株核酸为模板时,该方法可稳定检测到3.48×10~(-4)ng/μl RNA,与两对已公布的引物敏感性相同,比另1对引物敏感性高10倍。5个模板浓度梯度各3次重复检测的变异系数为0.06%~0.62%。该方法可以检出6株非洲型和亚洲型寨卡病毒,且与其他4种黄病毒无交叉反应。结论建立了寨卡病毒SYBR Green qPCR检测方法。该方法灵敏性高、特异性强、重复性好,为口岸提供了技术手段和技术支撑。(本文共计4页)......[继续阅读本文]

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