来源:《上海医学检验杂志》1997年第02期  作者:朱沛轩
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长聚合酶链反应(LPCR)的进展

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聚合酶键反应(PCR)是一种体外扩增DNA的有效技术。目前该技术主要用于扩增数百个到上千个碱基对(kb)的DNA片段。但是在许多分子遗传学研究中,如基因图谱分析,则需扩增更长的DNA片段才有价值。长片段DNA的PCR扩增近年已有报道[1],例如选择不同的耐热DNA聚合酶、改过缓冲浪成份及循环条件等,可以扩增出10~15kb的片段,但产量低,多数实际应用仍限制于5kb以内。直到1994年,Barnes[2]和Cheng[3]等对DNA合成中碱基错配现象和模板DNA的损伤两个问题进行了研究并探讨了解决办法,其结果使PCR扩增)噬菌体DNA达42kb,扩增复杂的人基因组DNA达22kb,这才使PCR扩增更长的DNA片段取得了实质性进展,兴起了所谓的“长PCR”(LongPCR,或LPCR),而将过去的PCR称之为“短PCR”.一、PCR中DNA合成的忠实性人们轻易考虑到的制约IXi:R产物长度的因素往往是雨引物间的距离、模板二级结构的形成及聚会辞活性等。而美国植物分子生物学家Barnes推测的制约因素主要有两个;即产物序列的忠实性和产物的分子量大小。忠实性是指扩增过程中减基是否错误装配导致低(本文共计2页)......[继续阅读本文]

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