来源:《时珍国医国药》2015年第07期  作者:毛福英;赵云生;万德光;陈新;邹玲;戴贵东;
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基于基因克隆的远志鲨烯环氧酶(SE)蛋白结构及进化分析

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远志皂苷是一种五环三萜皂苷,为远志的指标性活性成分。目前对五环三萜皂苷的生物合成途径已有一定了解,鲨烯环氧酶(SE)是其生物合成途径中一种关键酶,属细胞膜结合酶,催化鲨烯在C=C双键之间插入一个氧原子形成2,3-氧化鲨烯,然后在β-香树脂合成酶的作用下形成齐墩果烷型三萜皂苷碳环结构[1],本文首先克隆了远志鲨烯环氧酶(SE)基因DNA片段,在此基础上对远志鲨烯环氧酶(SE)蛋白进行了结构及进化分析,以期为远志皂苷的生物合成提供智力支持。1材料与试剂1.1植物材料试验材料采自山西省吕梁市,采后硅胶干燥,经万德光教授鉴定为远志Polygala tenuifolia Willd,保存于-80℃冰箱中。1.2菌种和试剂Ta KaRa凝胶回收试剂盒、大肠杆菌E.coliJM109、Ta KaRa p MD18-T Vector购自Takara公司,限制性内切酶Xsp I、UItra Pure TM质粒DNA小量提取试剂盒、UItra Pure TMPCR产物(DNA片段)纯化试剂盒、PCR产物小量胶回收试剂盒、X-gal、IPTG、Ampicilin均购自塞百盛公司。2方法2.1远志总DNA的提(本文共计2页)......[继续阅读本文]

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