来源:《分子植物育种》2019年第05期  作者:吴敏;贺晓;贺一鸣;李琪;金鑫;
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蒙古高原特有植物蒙古莸ISSR-PCR反应体系优化及引物筛选

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建立并优化适用于蒙古莸的ISSR-PCR扩增反应体系并筛选出稳定的ISSR引物,进一步研究蒙古莸群体的遗传多样性水平。采用单因素试验设计方法,以蒙古莸基因组DNA为扩增模板,对dNTPs、引物、Mg~(2+)、Taq DNA聚合酶、模板DNA进行优化。以此为基础,筛选出扩增条带清晰且多态性好的有效引物,并确定各引物最佳退火温度,最后用呼和浩特大青山、乌海渡口村、赛罕塔拉柄扁桃保护区的24个蒙古莸野生品种为材料验证体系的稳定性。最佳反应体系为:在总体积20μL的反应体系中,含10×PCR Buffer 2.5μL,Mg~(2+)2 mmol/L,Taq DNA聚合酶1.5 U,dNTP 1.5 mmol/L,引物0.5μmol/L,模板DNA 15 ng。此外,从100条ISSR引物中筛选出15条清晰稳定的引物,并确定了引物各自的最佳退火温度。首次建立了蒙古莸ISSR-PCR最适反应体系,这一体系的建立可应用于后续蒙古莸遗传多样性的研究。(本文共计6页)......[继续阅读本文]

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